更新時間:2023-11-20
LUYOR-3480微孔板細胞輻照儀是用于體外光遺傳(In Vitro Optogenetics)研究的工具,是一款體外細胞培養(yǎng)光遺傳刺激系統(tǒng)。體內(nèi)光遺傳學已成為研究小鼠、大鼠和其他動物神經(jīng)回路的標準技術。但隨著光激活蛋白和其他光反應工具數(shù)量的增加,該技術現(xiàn)在經(jīng)常用于多孔板和細胞培養(yǎng)皿中,用于組織培養(yǎng)、細菌、斑馬魚、幼蟲和其他研究模型的研究。LUYOR-3480微孔板細胞輻照儀可以提供理想的輻照波
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LUYOR-3480微孔板細胞輻照儀是用于體外光遺傳(In Vitro Optogenetics)研究的工具,是一款體外細胞培養(yǎng)光遺傳刺激系統(tǒng)。體內(nèi)光遺傳學已成為研究小鼠、大鼠和其他動物神經(jīng)回路的標準技術。但隨著光激活蛋白和其他光反應工具數(shù)量的增加,該技術現(xiàn)在經(jīng)常用于多孔板和細胞培養(yǎng)皿中,用于組織培養(yǎng)、細菌、斑馬魚、幼蟲和其他研究模型的研究。LUYOR-3480微孔板細胞輻照儀可以提供理想的輻照波長和光強度、輻照時間可以控制,輻照儀的光源能夠放置到細胞培養(yǎng)箱長時間工作。
1.輻照光源特別適用于96孔板,滿足 6、12、24、48 和 96 孔板。
2.光源部分和控制器連接線長2米,輻照儀光源部分能夠放置在細胞培養(yǎng)箱里面長時間工作。
3.光源部分能夠滿足培養(yǎng)箱的高濕度環(huán)境工作。
4.輻照光強度可調(diào)。
5.輻照時間可調(diào)。
6.可選波長:365nm、405nm、420nm、450nm、470nm、525nm、590nm、630nm、660nm、740nm
1.干細胞 (iPSC) 分化Stem cell (iPSC) differentiation
2.發(fā)育生物學 Developmental biology
3.分子生物學Molecular biology
–受體定向蛋白表達(通過 Cry2 激活)receptor directed protein expression (via Cry2 activation)
4.CRISPR/Cas9基因修飾CRISPR/Cas9 gene modification
5.腫瘤學 Oncology
6.眼科和眼科藥物開發(fā)Ophthalmology & ophthalmologic drug development
7.光刺激和蛋白質(zhì)漂白Photostimulation and bleaching of proteins
8.通道病,例如癲癇和心律失常。Channelopathies such as epilepsy, and arrhythmias.
9.光藥理學Photopharmacology
10.光解籠Photo-uncaging
11.光開關激酶抑制劑的創(chuàng)建Photoswitching
12.光動力療法的發(fā)展Development of Photodynamic therapies
13.光化學Photochemistry
光遺傳學(optogenetics)原理
首先采用基因操作技術將光感基因(如ChR2,eBR,NaHR3.0,Arch或OptoXR等)轉(zhuǎn)入到神經(jīng)系統(tǒng)中特定類型的細胞中進行特殊離子通道或GPCR的表達。光感離子通道在不同波長的光照刺激下會分別對陽離子或者陰離子的通過產(chǎn)生選擇性,從而造成細胞膜兩邊的膜電位發(fā)生變化,達到對細胞選擇性地興奮或者抑制的目的。
光遺傳通常是指結合光學與遺傳學手段,控制特定神經(jīng)元活動的技術。該技術利用分子生物學、病毒生物學等手段,將外源光敏感蛋白基因?qū)牖罴毎校诩毎そY構上表達了光敏感通道蛋白;然后通過特定波長光的照射,控制細胞膜結構上的光敏感通道蛋白的激活與關閉;光敏感蛋白的激活和關閉可控制細胞膜上離子通道的打開與關閉,進而改變細胞膜電壓的變化,如膜的去極化與超極化。當膜電壓去極化超過一定閾值時就會誘發(fā)神經(jīng)元產(chǎn)生可傳導的電信號,即神經(jīng)元的激活;相反,當膜電壓超極化到一定水平時,就會抑制神經(jīng)元動作電位的產(chǎn)生,即神經(jīng)元的抑制。神經(jīng)元生物學家經(jīng)常運用這種技術,通過光學方法無損傷或低損傷地控制特異神經(jīng)元的活動,來研究該神經(jīng)網(wǎng)絡功能,特別適用于在體、甚至清醒動物行為學實驗。
-同時,利用類似的光學與遺傳學手段,可控制腦細胞外其它細胞中的蛋白表達,從而實現(xiàn)光誘導蛋白質(zhì)表達,啟動細胞內(nèi)生物學過程,進而控制生物行為。因此光遺傳技術在生命活動與疾病研究中應用廣泛。
光遺傳學技術調(diào)控細胞的活性取決于光敏感通道蛋白的種類,即興奮性光敏感通道和抑制性光敏感通道。如果轉(zhuǎn)入細胞的通道是ChR,在細胞受到藍光照射時,通道開發(fā),陽離子大量內(nèi)流,產(chǎn)生去極化誘發(fā)動作電位,激活細胞;如果轉(zhuǎn)入細胞的通道是HR,細胞在受到黃光照射時,通道開放,陰離子大量內(nèi)流,產(chǎn)生超極化導致動作電位不易發(fā)出,抑制細胞活性;此外,還有一類光激活或抑制的通道optoXR,給予一定頻率的光激活后,改變的是細胞內(nèi)激酶系統(tǒng),影響細胞活動。
各種不同蛋白所用波長
顏色 | 波長 | Common Opsin | 描述 |
紫外線 | 365nm | OptoSTIM1 | 365 nm 的紫外線對組織的穿透力有限。它主要用于激發(fā)紫外線敏感的視蛋白,從而控制組織表層的細胞活動。 |
紫色 | 405nm、420nm | OptoSTIM1 | 405 nm 和 420 nm 的紫光可適度穿透組織。它能夠控制表層和深層的細胞活動。 |
藍色 | 450nm | Channelrhodopsin-2 (ChR2) | 450 nm 和 470 nm 的藍光表現(xiàn)出中等的組織穿透力。它通常用于激活視紫紅質(zhì)通道蛋白-2 (ChR2),誘導去極化并增加淺表和深層區(qū)域的神經(jīng)活動。 |
綠色 | 525nm | Green-Activated Protein (GAP) | 525 nm 的綠光可適度穿透組織。它提供了激活和抑制各種視蛋白的多功能選項,從而能夠控制淺層和深層組織層的神經(jīng)回路。 |
黃色 | 590nm | Halorhodopsin (eNpHR3.0) | 590 nm 的黃光表現(xiàn)出中等的組織穿透力。它通常用于使用鹽視紫紅質(zhì)等視蛋白來抑制神經(jīng)元活動,從而促進淺表和深層組織區(qū)域的神經(jīng)抑制。 |
紅色 | 630nm、660nm、740nm | ReaChR | 與較短波長相比,630 nm、660 nm 和 740 nm 的紅光可提供更深的組織穿透力。由于其有效的組織滲透性,它能夠激活或抑制大腦深部區(qū)域的神經(jīng)元。 |
紅外線 | 940nm | Jaws | 940 nm 的紅外光在上述波長中具有深的組織穿透力。它可用于刺激厚腦切片中的神經(jīng)元或到達更深的大腦區(qū)域。 |
光毒性是體外光遺傳學實驗的一個重要問題,因為它可能對細胞造成潛在損害。藍光會降低神經(jīng)元細胞的整體活力,并可以改變神經(jīng)元的形態(tài)。在體外研究中提高細胞活力的一種方法是降低藍光熒光強度。觀察到增加藍光熒光強度不利于細胞活力。
不同的視蛋白對整個光譜的光表現(xiàn)出不同的敏感性。例如,視紫紅質(zhì)通道蛋白-2 (ChR2)(一種常用的藻類蛋白)可大程度地被藍光和紫光激活。同樣,對其他波長(例如綠光、紅光甚至紫外光)敏感的視蛋白可用于體內(nèi)和體外光遺傳學實驗,以選擇性地調(diào)節(jié)細胞反應并研究特定的信號傳導途徑。
體外光遺傳學實驗中使用的視蛋白和相應波長的選擇取決于您的個人目標和所研究的特定細胞反應。了解視蛋白對光的敏感性是體外光遺傳學實驗成功和解開細胞活動和信號傳導途徑的機制的關鍵。
藍光(470 nm):在 Stierschneider 的出版物中,藍光被用作體外光遺傳學的工具,以激活人胰腺細胞中的 Toll 樣受體 4 (TLR4) 信號通路和 NF-κB-Gluc 報告系統(tǒng)。通過將細胞暴露在藍光下,研究人員能夠控制這些通路的激活,從而可以在受控的實驗室環(huán)境中詳細研究它們的動力學和調(diào)節(jié)機制。
黃光(590 nm):使用發(fā)射黃光的體外光遺傳學表明人類和小鼠 CD8+ T 細胞激活期間線粒體的整體功能有所增加。Amuza LED 陣列( 590 nm) 用于通過 ATP 測定照亮 HEK293T 細胞和 CD8+ T 細胞。
體內(nèi)研究過程中需要考慮的 3 個關鍵因素是視蛋白敏感性、組織滲透性和光毒性。通過選擇適當?shù)囊暤鞍缀凸獠ㄩL,研究人員能夠研究目標組織中的細胞反應和信號傳導途徑,同時將光毒性保持在低限度。
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